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腺病毒ADV

腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一种无包膜的线性双链DNA病毒，具有普遍的细胞和组织熏染能力。熏染历程强烈，适于短时间内举行基因高表达的实验，与其它病毒相比，腺病毒优势在于插入片断较长，表达活性强。

　　体外应用时，腺病毒载体转基因效率高（靠近100%的转导效率），且可转导差别类型的细胞，关于大宗难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。可是，在体内应用时，由于腺病毒免疫原性强，熏染强烈，故  ；嵋鸲锞植孔橹字⒎从突迕庖叻从，对动物体征和实验效果的客观性造成影响。
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ADV包装和侵染历程

腺病毒包装与纯化

　　腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞，待细胞泛起CPE状态后通过网络细胞上清和细胞裂解物，通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。 
　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒对组织作育细胞侵染后爆发的细胞变性，使用此种病变效应可举行病毒定量。
 

腺病毒滴度检测

　　检测要领：酶联免疫法腺病毒滴度测定，凭证盘算熏染后染成褐色的阳性细胞数，来盘算病毒滴度。
       实验原理：腺病毒熏染的阳性细胞表达的衣壳卵白被染成褐色。
       检测要领：免疫显色要领
       实验原理：通过抗5型腺病毒外壳卵白的单抗与待熏染腺病毒样品的细胞团结，再用HRP标记的二抗与一抗团结，经显色液显色，被熏染的细胞酿成褐色，凭证阳性细胞数，来盘算病毒滴度。

腺病毒载体优势

       ① 表达快，腺病毒熏染细胞后，1-2天即可表达
       ② 载体容量大，熏染效率高，常用于熏染难熏染的细胞
       ③ 不整合到染色体中，无插入致突变性
       ④  具有嗜肝性，易于熏染肝细胞，腺病毒的体内应用是用于熏染肝脏
　   不过由于腺病毒免疫原性高，对某些对外源刺激敏感的动物模子和组织中易造成炎症，体内应用需审慎。

差别病毒的生物学特征较量
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载体选择
　　bti体育生物拥有富厚的腺病毒产品，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒载体可供您选择：
调控方法 载体编号 载体名称（载体元件顺序） 真核抗性 荧光 启动子 默认标签 载体容量
过表达 H225 pADV-mCMV-MCS-3xFLAG N/A N/A mCMV 3FLAG >6kb
H201 pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H213 pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H221 pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H204 pADV-mCMV-mCherry-HA N/A mCherry mCMV HA >5kb
H222 pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry N/A mCherry mCMV 3FLAG >5kb
H12588 pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG N/A mNeonGreen CMV 3FLAG >4kb
H12589 pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG N/A mScarlet CMV 3FLAG >4kb
circRNA过表达 H6946 pADV-CMV-S-circRNA N/A N/A CMV N/A >5kb
miRNA过表达 H216 pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
表达cre K0024  pADV-CMV-Cre N/A N/A CMV N/A N/A
滋扰 DKD001 pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
DKD004 pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry N/A mCherry U6 N/A N/A
CRISPR敲除 H5064 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9 N/A N/A U6 3FLAG N/A
H9350 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A sfGFP U6 3FLAG N/A
H5066 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
H218 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
H5449 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
　　
 

应用实例

　　1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]
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　　熏染部位：肝脏
　　
　　载体名称：Ad-CBS
　　
　　注射方法：尾静脉
　　
　　注射量：1 x1011 PFU/mL，10ul
　　
　　检测时间：7天
　　
　　2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]
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　　熏染部位：肝脏
　　
　　载体名称：Ad-ATG7
　　
　　注射方法：尾静脉
　　
　　注射量：1 x109 PFU /只
　　
　　检测时间：10天
　　
　　3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
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　　注射部位：大鼠大脑皮层
　　
　　载体名称：Ad-FBLN
　　
　　注射方法：脑立体定位注射
　　
　　注射量：三种差别剂量
　　
　　检测时间：7天
　　
　　bti体育生物腺病毒的生产和质控接纳了国际学术界公认的标准流程，接纳AdEasy及Admax腺病毒包装系统在HEK-293细胞中举行包装。所获得的病毒颗粒经由超速密度梯度离心和过滤，并通过壳卵白免疫法举行滴度测定。一样平常情形下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml，完全可以知足种种实验的使用要求。

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