病毒载体构建效劳包括慢病毒、腺相关病毒、腺病毒和逆转录病毒载体等,构建内容包括基因过表达载体构建、基因定点突变表达载体构建、用于基因默然的shRNA设计与构建、microRNA表达与关闭载体设计与构建、萤光素酶报告基因载体构建(UTR、启动子及其它功效序列)以及Cre-LoxP系统和CRISPR/Cas9基因编辑工具载体设计与构建等,力争一站式解决基因功效研究中的基因上协调基因下调需求。
质粒优势:
①表达时间快,导入细胞后约24小时可视察到目的基因表达;
②构建手艺简朴,本钱低。
③bti体育的过表达载体库富厚,并且过表达的标记富厚
荧光标记:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
标签标记: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
抗性标记:Puro、Neo、Hygro、BSD…
局限性:
①转染试剂具有细胞毒性,使用后影响细胞状态;
②大部分细胞较难转染,达不到基因操作目的;
③质粒不整合到细胞基因组,只能举行短时间的瞬时表达,无法举行视察周期较长的实验。
由于纯粹质粒保存一定的局限性,凭证实验需要需包成病毒进一步知足差别实验的需求。
差别表达载体的区别
表达系统 |
真核表达载体 |
慢病毒载体 |
重组腺相关病毒载体 |
重组腺病毒载体 |
载体基因特征 |
双链DNA质粒 |
RNA逆转录病毒 |
单链DNA病毒 |
双链DNA病毒 |
外源基因表达时间 |
24h最先表达,一连3-7天 |
2-4天最先表达,长时间稳固表达 |
7-14天最先表达 |
1-2天最先表达 |
插入片断巨细 |
8kb左右 |
4kb左右 |
2.8kb左右 |
6kb左右 |
稳固细胞株筛选 |
难操作 |
可以 |
不可以 |
不可以,瞬时表达 |
细胞实验 |
细胞系,部分转染效率低 |
首选,广谱,熏染效率高 |
不适合 |
广谱,熏染效率高 |
动物实验 |
不适合 |
适合,凭证视察时间和注射部位 |
首选,凭证视察时间和注射部位 |
免疫原性高,慎选 |
滴度规模 |
无 |
108~109TU/ml |
1012-1013vg/ml |
1010-1011pfu/ml |